Laboratorní metody alergické diagnostiky

Tyto metody mohou být široce používány při alergických onemocněních v akutní fázi, v období masivního kontaktu s alergenem, s vysokou citlivostí pacientů na alergen, pokud jsou u dětí kontraindikace při identifikaci alergických nemocí z povolání, protože vylučují možnost nespecifických, falešně alergických reakcí.

Metody, které detekují alergickou reakci okamžitého typu závislého na B zahrnují:

a) stanovení celkového IgE (nicméně jeho vysoká hladina může být v produktivní fázi imunitní reakce),

b) stanovení alergen-specifických IgE a IgG4.

Hladiny IgE a IgG4 se stanoví testem ELISA (viz lab. Třída 6).

Detekce IgE a IgG4 se provádí proti více než 400 alergenům, včetně potravinových alergenů; alergeny bakterií a hub, zvířecí lupy a lupy, ptačí peří; alergeny trávy a pylu stromů; alergeny klíšťat, domácího a knihovního prachu, hmyzu; léčivé a pracovní alergeny.

V současné době byly vyvinuty testovací systémy, které umožňují vícenásobnou diagnostiku specifických IgE. Vícečetný alergosorbentní test s použitím chemiluminiscenční analýzy (MAST-CLA, nebo MAST-alergotest) umožňuje současně stanovit až 36 alergenů s použitím malého množství séra (0,75 ml). Pro tento test se používá MAAST-alergopanel, což je duté průhledné plastové pouzdro s nejtenčími celulózovými vlákny rovnoběžnými s vnitřkem, na kterých jsou alergeny sorbovány (Obr. 9.1).

Poznámka: 1 - Sestava panelu MAST, 2 - kryt,

3 - celulózová příze s adsorbovaným alergenem, 4 - tělo

Obr. 9.1 Princip chemiluminiscenční analýzy během MAST

Podstatou alergického testu MAST je provedení reakce vazby alergenu se specifickými IgE, následované značením výsledného komplexu fotoreagentem a určením jeho luminiscence, jejíž intenzita je úměrná koncentraci specifického IgE v séru pacienta. Alergopanel MAST se naplní (běžnou injekční stříkačkou) sérum pacienta, inkubuje se 16 až 24 hodin při teplotě místnosti. Poté se po promytí panelu obyčejnou destilovanou vodou pufrem naplní konjugátem (peroxidázou značená anti-IgG) a inkubuje se po dobu 4 hodin. Po promytí se panel naplní fotoreagentem a analyzuje v luminometrech. Zařízení registruje třídu hodnot od 0 do 4 v souladu s úrovní luminiscence z každého jednotlivého vlákna panelu. Tyto třídy odpovídají třídám kožních testů. Úrovně IgE odpovídající třídám alergie MAST a hodnotám luminometru jsou uvedeny v tabulce 9.2.

Interpretace výsledků při provádění vícečetného alergického testu

Spolu s detekcí specifických IgE se používají další laboratorní testy k diagnostice jak na protilátkách závislých, tak na zpožděných reakcích. Tyto metody nám umožňují studovat patogenezi alergických reakcí. Patří mezi ně:

- degranulační reakce žírných buněk nebo basofilů,

- reakce inhibice migrace krevních leukocytů (RTML),

- reakce na poškození neutrofilů (RPN),

- definice vázaného histaminu,

- stanovení IL 4,5,6, TGFb,

- stanovení tryptázy a chymotryptasy (tryptáza, zejména β-forma, může být detekována v krvi 4 hodiny po anafylaktické reakci a slouží jako klinický marker anafylaxe),

- stanovení leukotrienů (LTC4, LTD4, LTE4) s použitím testu uvolňování buněčných mediátorů,

- stanovení počtu aktivovaných bazofilů exprimujících CD63 antigen (gp53) na povrchu v odezvě na stimulaci alergenu (cytometrický test stimulující alergen, CASC test).

Definice těchto ukazatelů vám umožní pochopit jednotlivé charakteristiky průběhu alergických reakcí, které jsou důležité pro léčbu pacienta.

Buněčný test na uvolňování mediátorů je založen na stanovení sulfidol-leukotrienů (LTC4, LTD4, LTE4) vylučovaných bazofily pod vlivem alergenu in vitro (Obr. 9.2). Také se nazývá in vitro provokativní test. Vzhledem k de novo syntéze sulfidol-leukotrienů má tento test vyšší specificitu ve srovnání s klasickým testem uvolňování histaminu. Protokol studie obsahuje tři kroky:

1) izolaci populace lymfocytů ze stabilizované EDTA krve,

2) stimulace lymfocytové suspenze specifickými alergeny,

3) enzymově vázaný imunosorbentní test leukotrienů syntetizovaných bazofily během stimulace.

Obrázek 9.2 Princip stimulačních testů bazofilního antigenu

Test se považuje za pozitivní pro potraviny, inhalační alergeny, latex, hmyzí jedy při stanovení hladiny leukotrienů 200 pg / ml; pro lékové alergeny, jakož i potravinářské a chemické přísady 40 pg / ml.

Cytometrická varianta stimulačního testu basofilů - cytometrický antigen, který stimuluje buněčný test (CASK test) umožňuje stanovit počet aktivovaných bazofilů exprimujících antigen CD63 na povrchu. Fáze izolace lymfocytů a stimulace jejich antigenů pro obě varianty (enzymová imunoanalýza a cytometrie) jsou identické. Ale místo sulfidol leukotrienů třetí stupeň určuje počet aktivovaných bazofilů exprimujících CD63 antigen (gp53) na povrchu v reakci na stimulaci alergenem. Test je vysoce citlivý a specifický pro reakce anafylaktického typu, zejména pro přecitlivělost na léky.

V testu CASK jsou izolované leukocyty inkubovány se stimulačním pufrem a alergenem. Pak se přidá anti-IgE monoklonální Ab s fluorescenční značkou pro identifikaci bazofilů, pak monoklonálních protilátek k CD63 (viz obr. 9.2) a exprese CD63 AH se stanoví na povrchu bazofilu průtokovou cytometrií. Například u potravinových a inhalačních alergenů je test považován za pozitivní, když je CD63 exprimován na povrchu 15% bazofilů; pro jedy hmyzu - 10%; beta-laktamová antibiotika a analgetika - 5% bazofilů a stimulační index 2. Vypočítejte index stimulace definovaný jako poměr bazofilů CD63 + ve vzorku s alergenem (%) k počtu těchto buněk ve vzorku bez alergenu (%).

Caska test je specifický pro stanovení IgE-zprostředkované alergie na inhalační alergeny (při kožní zkoušky nemohou být provedeny kvůli riziku bronchospasmu a status asthmaticus), pyl, drogy, beta-laktamových antibiotik, svalová relaxancia, analgetika, alergie na latex, bodnutí z Hymenoptera hmyz, pseudoalergické reakce na protizánětlivé nesteroidní léky indukované komplementovými složkami, plazma, stanovení autoprotilátek proti IgE. Výsledky testu CASK dobře korelují s výsledky kožních testů.

Oba testy jsou vysoce specifické pro diagnostiku potravinových alergií a nesnášenlivosti, inhalační alergie, kdy nelze použít kožní testy (pro alergie na latex, kousnutí hmyzu hymenoptera, alergie u dětí, alergie na léky a intolerance, různé pseudoalergické reakce).

Použití CASK-testu a buněčného testu uvolnění mediátorů v diagnostice potravinových alergií a intolerance, pseudoalergické reakce mohou být použity k sestavení hypoalergenní a eliminační diety.

Diagnostika pseudoalergických reakcí. Pseudoalergické reakce v klinických symptomech mohou být podobné skutečným reakcím zprostředkovaným IgE, ale liší se svým vývojovým mechanismem. Jejich vývoj nesouvisí s tvorbou Ab nebo s účastí senzibilizovaných lymfocytů, v patogenezi těchto reakcí jsou pouze dva stupně - patchemické a patofyziologické. V tomto ohledu je u těchto pacientů sérová koncentrace IgE obvykle v normálním rozmezí.

Během pseudoalergických reakcí však dochází k nespecifickému uvolňování mediátorů: histamin, leukotrieny, prostaglandiny. Pro diagnostiku pseudoalergických reakcí se proto test CASA používá k detekci aktivovaných bazofilů a buněčných testů uvolňování mediátorů za účelem stanovení koncentrace LTC4, LTD4 a LTE.

http://studopedia.org/12-101069.html

METODY DIAGNOSTIKY V VITRO

Hlavní indikace jsou:

- rané dětství;

- vysoký stupeň senzibilizace pacientů;

- průběžně relabující průběh onemocnění bez období remise;

- neschopnost zrušit antihistaminikum a jiné léky;

- polyvalentní senzibilizace, kdy není možné provádět in vivo testování najednou se všemi podezřelými alergeny v omezeném období vyšetření;

- ostře změnila reaktivitu kůže;

falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledek v kožním testování;

Hlavní výhody specifických diagnostických metod in vitro jsou:

- bezpečnost pro pacienta;

- vysoký standard a reprodukovatelnost;

- možnost kvantitativního (digitálního) účetnictví;

- možnost provádět výzkum v případě, že pacient je ve velké vzdálenosti od alergika a je dodáno pouze pacientovo sérum;

- malé množství krve pro výzkum.

Moderní metody používané pro diagnostiku alergických onemocnění in vitro jsou uvedeny v tabulce. 1.

Moderní metody používané při diagnostice alergických onemocnění in vitro

Metody pro stanovení celkového IgE v séru

Koncentrace IgE v séru zdravých lidí je uvedena v tabulce. 2

U alergických reakcí okamžitého typu se zpravidla zvyšuje celková hladina IgE v krevním séru, v některých případech však tento ukazatel může odpovídat normě. U dětí s vysokou hladinou IgE je však zjištěno zvýšené riziko vzniku alergií. Atopická onemocnění postihují 95% dětí s vysokou hladinou IgE. U přibližně 70% dospělých pacientů s exogenním astmatem a alergickou rýmou, hladina IgE překračuje standard o dvě standardní odchylky. Zvláště vysoké (více než 1000 IU / ml) hladiny IgE jsou zaznamenány při difuzní neurodermatitidě a atopických onemocněních dýchacích cest.

Koncentrace IgE v séru zdravých lidí

Vysoce citlivé imunologické studie, které mohou detekovat i nízké koncentrace IgE (méně než 50 IU / ml) jsou: t

1. Imunotest (ELISA). Pro kvantifikaci hladiny celkového IgE se použije ELISA na pevné fázi (obr. 6), ve které jsou protilátky proti IgE adsorbovány na pevném nosiči, například v jamkách polystyrénové desky. Komplex vytvořený po podání testovaného séra se detekuje přidáním odpovídajících protilátek konjugovaných s enzymovou značkou (křenová peroxidáza, beta-galaktosidáza a alkalická fosfatáza).

Princip nastavení ELISA pro stanovení IgE

Po smíchání antigenu s imunitním sérem značeným enzymem se ke směsi přidá substrát / chromogen. Substrát se štěpí enzymem a mění se barva reakčního produktu; intenzita barev je přímo úměrná počtu vázaných molekul antigenu a značených protilátek. Pozitivní výsledek mění barvu chromogenu. Pokaždé po přidání další složky se nenavázaná činidla odstraní z jamek promytím. Účtování intenzity reakcí experimentálních a kontrolních vzorků se provádí na deskovém spektrofotometru (čtečka ELISA) o množství absorpce světla se specifickou vlnovou délkou (pro chromogen TMB (tetramethylbenzidin) je 450 nm).

2. Chemiluminiscenční ("sendvičová") analýza s použitím paramagnetické značky.

Anti-IgE-AT značený luminiscenční značkou (akridinový ester) se přidá do pacientova séra. Po promytí nevázaných protilátek se přidají anti-IgE protilátky kovalentně navázané na paramagnetické částice. K tomu je zapotřebí speciální měřicí zařízení, které obsahuje fotometr a elektrodu s magnetem. Magnet zachycuje paramagnetické částice spojené s konjugáty IgE, v důsledku elektrochemické reakce dochází k luminiscenci značky, která se měří fotometricky. Příklady takových zařízení jsou ACS: 180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). Metoda je vysoce citlivá a umožňuje stanovit koncentraci celkového IgE v rozmezí 1,5-3000 kE / l.

3. Radioimunitní analýza (RIA) je metoda založená na značení jedné ze složek imunologické reakce (antigenu nebo protilátky) radioaktivním izotopem I125. Pro kvantifikaci hladiny celkového IgE je použita nepřímá nebo kompetitivní RIA fáze pevné fáze (na pevné fázi jsou imobilizovány protilátky proti lidskému IgE zachycené na lidském povrchu). V druhém případě se do systému přidává současně sérum pacienta a určité množství IgE značeného I125. V důsledku reakce dochází k vazbě této složky, nepřímo úměrné obsahu IgE v séru pacienta. Výsledky jsou vyhodnoceny pomocí gama čítače pro radioaktivitu výsledných imunitních komplexů.

Vzhledem k tomu, že RIA vyžaduje drahá zařízení a reagencie, stejně jako podmínky pro práci s radioaktivními izotopy, je v současné době málo používán.

Metody používané v moderní praxi pro stanovení alergen-specifických IgE v séru

Vysoce citlivé a specifické metody pro stanovení alergen-specifických IgE protilátek jsou PAST, MAST, imunobloting, ELISA v pevné fázi, microarray.

RAST (radioallergic sorbent test) je metoda pro stanovení specifických IgE protilátek v pacientově séru na alergen dříve sorbovaný na porézním nosiči (obr. 7).

Do pacientova séra se zavádí nerozpustný polymer - alergenový konjugát, který absorbuje protilátky specifické pro použitý alergen. Dále se přidá antiglobulinové sérum (anti-IgE), značené radioaktivním izotopem. Po promytí nenavázaných činidel se výsledky vyhodnocují pomocí čítačů gama na úrovni radioaktivity vytvořených imunitních komplexů ve srovnání s kontrolou a standardní křivkou.

Stanovení specifického IgE pomocí PACT je prokázáno při vysokém riziku anafylaktických reakcí, kožních lézí a léčby, což ovlivňuje výsledky kožních testů.

V současné době je široce používána třetí generace RAST, která se vyznačuje vysokou citlivostí a specificitou, automatizací, použitím fluorochromu, enzymovými značkami nebo chemiluminiscencí.

Princip nastavení RAST (L. Wide)

Stanovení alergenu specifického IgE v PACT s fluorescenční značkou

K alergenu sorbovanému na nosiči celulózy přidejte sérum pacienta. Poté se přidá enzymem značená (a-galaktosidáza) anti-IgE-AT, která se váže na výsledný konjugát. Po praní nenavázaných protilátek se přidá substrát (4-methylimbelliferyl-p-D-galaktosid) v případě fermentace, při které se tvoří fluorescenční látky, jejichž koncentrace se detekuje pomocí čtečky (FluoroCount).

Jako příklad metody založené na účinku chemiluminiscence může být podáván MAST.

MACT (Multiple Allergy Testing Test) je metoda pro stanovení alergen-specifického IgE, podobného principu PACT, kde je alergen sorbován na celulózových filamentech a fotoreagenty, jejichž luminiscence je zaznamenána na filmu Polaroid, se používají na luminometru na fotometru (Obr. 8).. Metoda umožňuje rychle získat výsledky studie, umožňuje stanovit potřebné parametry i u jednoho pacienta, aniž by se čekalo na akumulaci vzorků pro použití celé sady.

Zařízení pro nastavení MAST

1 - montáž panelu MAST; 2 - kryt; 3 - celulózová příze s adsorbovaným alergenem; 4 - tělo

Pseudoimmunoblot - metoda, která umožňuje současně detekovat specifické IgE protilátky na spektrum alergenů (každý z nich) v séru nebo jiném materiálu. Pseudoimmunoblot je založen na testu ELISA na pevné fázi, ale na rozdíl od posledně uvedeného má větší specificitu (ale menší citlivost), rychlost provedení, minimální objem krve (méně než 0,5 ml), možnost současného testování s velkým počtem alergenů (asi 20 v každém panelu).. Kromě toho se nyní uplatňuje program přesného zpracování výsledků.

Moderní testovací systémy jsou postaveny na principu dvouúrovňové definice statusu alergenu: standardní vyšetření alergie se provádí na první úrovni, což umožňuje stanovení skupiny alergenů, na které je citlivost alergenu provedena. Poté je možné provést rozšířené (přesnější a složitější) stanovení citlivosti na specifický alergen.

Klasický imunoblot se používá v případě jasných indikací příčinného alergenu (data z anamnézy, eliminačního testu atd.) A negativních výsledků testů pro specifické IgE s charakterizovanými složkami tohoto alergenu. V takových případech se bloty získávají z hrubého extraktu alergenu a pacientovo sérum se analyzuje na přítomnost IgE specifického pro minoritní (ne charakterizované) složky alergenu.

Microarrey (microarrey) je relativně nový (vyvinutý v 90. letech) a velmi slibný směr v aplikované molekulární biologii. V současné době získává mikroerray technologie založená na oligonukleotidech DNA největší pozornost, ale mikročipy se také vyvíjejí s použitím monoklonálních protilátek a rekombinantních antigenů. Tato technologie se používá zejména k diagnostice a optimalizaci léčby alergií (obr. 9).

Schéma mikročipu pro diagnostiku alergií

Výzkum probíhá v několika fázích:

1. Příprava mikročipu: rekombinantní alergeny jsou vyhloubeny na povrchu aktivovaného sklíčka (objem kapek je nanolitrů, množství antigenu je desítky pikogramů). Jedna sklenice obsahuje 12 buněk. Každá buňka obsahuje desítky (stovky) různých alergenů a kalibrační křivku (zvyšující se množství IgE) v trojčatech.

Současně může být vyšetřeno až 12 pacientů.

a) vykopání séra pacienta (15 μl);

b) inkubace (IgE pacienta se váže na alergeny);

c) přidání monoklonálních protilátek anti-IgE značených fluorochromem;

d) skenování mikročipu;

e) typický scanogram mikročipu:

- první tři řádky = kalibrační křivka (intenzita záře je úměrná počtu fixních IgE);

- dále - profil senzibilizace pacienta (specifičnost a množství IgE v séru pacienta).

Testy buněčné aktivace s alergeny (CAST) jsou moderní metody diagnostiky GST mediátorového typu, které nejsou způsobeny IgE (Obr. 10).

Stážový princip CAST / FAST

1 - stimulace bazofilů (závislá na IgE, s použitím alergenu; použití protilátek proti FceRI; nezávislé na IgE, s použitím potravinářských přídatných látek, nesteroidních protizánětlivých léčiv (aspirin), léčiv); 2 - identifikace bazofilů. Provádí se pouze pro FAST, obvykle pomocí značených protilátek proti receptorům IgE nebo chemokinům CCR3; 3 - popis reakce. CAST se bere v úvahu kvantitativním stanovením leukotrienů (typ). FAST - stanovením procenta aktivovaných bazofilů (exprimujících CD63) pomocí cytofluorimetrie

Dříve byla podobná reaktivita detekována v testech poškození leukocytů a stimulace uvolňování histaminu bazofily, ale jsou příliš pracné, špatně reprodukovatelné a nejsou přístupné standardizaci. СAST / FAST je uveden v několika fázích:

1. Izolace krevních leukocytů:

a) přidá se dextran do stabilizované krve k vysrážení erytrocytů;

b) supernatant se odstředí, aby se vysrážely leukocyty (odstranění dextranu a destiček);

c) peleta leukocytů se resuspenduje v roztoku pufru obsahujícím IL3.

2. Stimulace leukocytů:

a) s protilátkami proti FceRI (pozitivní kontrola);

b) fyziologický roztok (negativní kontrola);

c) alergen (y) v různých koncentracích.

3. Supernatanty jsou vybrány a obsah leukotrienu je okamžitě stanoven testem ELISA na pevné fázi. Pro kvantifikaci je nutné pro sestavení kalibrační křivky použít několik ředění standardů.

4. Interpretace zkoušky. U potravinových alergenů je nižší (prahová) hladina (cut-off) obvykle 400 pg / ml; pro potravinářské přídatné látky, lékové alergeny, vzduchové alergeny - přibližně 40 pg / ml.

FAST se liší od CAST ve způsobu počítání aktivovaných bazofilů: detekce a počítání procenta buněk exprimujících CD63 a asociovaného IgE (Obr. 11). Buňky, které nás zajímají, by měly mít IgE navázané na povrchu, tj. Vázat anti-IgE protilátky značené FITC a silně svítit zeleně. Aktivované žírné buňky kromě toho exprimují CD63, vážou anti-CD63 protilátky značené PE a září červeně. Test je tedy pozitivní, pokud se ve druhém kvadrantu nachází významné (> 5–15%) procento buněk (body na grafu). V současné době existují komerční soupravy pro formulaci kombinovaných testů (CAST a FAST v jedné zkumavce).

Je třeba poznamenat, že CAST / FAST odhaluje leukotrienovou sekreci leukocyty jak ve spojení, tak bez přítomnosti alergen-specifického IgE. Hlavní indikace pro použití CAST / FAST: podezření na typ mediátoru GNT a absence specifického IgE; přítomnost přecitlivělosti na potravinářské přídatné látky a lékové alergeny; diagnózy astmatu aspirinu a podobných stavů. CAST / FAST se nedoporučují jako testy primárních alergologických vyšetření (jsou obtížnější, dražší a jsou horší než standardní testy pro detekci specifických IgE (UniCAP, atd.)).

a - negativní kontrola; b - pozitivní kontrola. Označení: PE - fykoerytrin (červená záře); FITC - fluorescein (zelený); Q1-4 - kvadranty na grafu distribuce buněk (Q1 - silná červená záře, slabá zelená; Q2 - silná červená a silně zelená; Q3 - slabá červená a slabá zelená; Q4 - slabá červená a silná zelená záře)

Metody zaměřené na studium pro-alergických cytokinů a mediátorů imunitního zánětu.

Stanovení mediátorů a cytokinů v systémové cirkulaci (obvykle metodou ELISA v pevné fázi):

1. Detekce histaminu je obtížná vzhledem k extrémně vysoké inaktivaci (minuty), proto je detekce methyl-histaminu v moči častěji používána k detekci jeho přítomnosti v systémové cirkulaci (anafylaktický šok) (vysoká hladina přetrvává několik hodin po vymizení systémové anafylaxe).

2. Stanovení tryptázy v séru. Tryptáza je obsažena v granulích žírných buněk a je uchovávána po dlouhou dobu (několik hodin) v oběhu.

3. Stanovení cytokinového stavu periferní krve (IL4, IFNy, IFNy / IL4) poskytuje extrémně obecnou představu o povaze typu reakce imunitního systému v době testu. To bylo populární v 80. letech. minulého století. Později - v 90. letech. Model Th1 / Th2 umožnil studii úlohy T-regulátorů při alergiích.

4. Stanovení obsahu buněk vylučujících určité cytokiny. V současné době je možné stanovit tyto parametry pro alergen-specifické buňky (tetramerová technologie). Pro tyto účely se často používá průtoková cytofluorimetrie a alispot.

Stanovení cytokinů a mediátorů ve tkáních (umožňuje zjistit povahu zánětu, jeho intenzitu, převažující patogenezi):

1. Definice NO ve vydechovaném vzduchu: jednoduchý neinvazivní test, který vám umožní sledovat intenzitu zánětlivého procesu v dýchacích cestách (monitorovat léčbu bronchiálního astmatu).

2. Stanovení mediátorů a cytokinů v promývacích roztocích, exsudátech a dalších odtržitelných poškozených tkáních.

3. Identifikace buněk syntetizujících cytokiny a mediátory na řezech z biopsií poškozených tkání.

4. Kvantitativní stanovení mRNA cytokinů a mediátorů v promytích, šrotech a bioptickém materiálu.

Je třeba poznamenat, že metody stanovení cytokinů v alergických procesech se používají hlavně pro vědecké účely.

Testy historického významu

Shelleyho / Schwartzův test - degranulace bazofilů / žírných buněk v přítomnosti specifického alergenu. Test byl široce používán v laboratorní diagnostice alergických onemocnění typu I.

Nepřímý basofilní test (Shelleyův test). Tento test je založen na studiu morfologických změn bazofilů v důsledku interakce séra pacienta a specifického alergenu. Neutrální červené barvivo selektivně barví basofilní granule v cihlově červené barvě, což jim umožňuje odlišit se od ostatních buněk. Reakce je pozorována pod mikroskopem s imerzním systémem. Nezměněné basofily mají zaoblený tvar; barevné granule jsou umístěny uvnitř buňky. Pozitivní reakce se projevuje deformací buněk, tvorbou pseudopodií, zvýšeným pohybem granulí a ve vzácných případech uvolňováním granulí z buňky s jejím roztržením. Každý preparát má 40 bazofilů, procento morfologicky změněných buněk je vypočteno jak v experimentu, tak v kontrole.

Podmíněně přidělte 3 stupně reakce: slabé (procento změněných bazofilů v experimentu je vyšší než v kontrolním vzorku o 10%), mírné (o 15%), ostře pozitivní (o 20% nebo více). Ve všech případech se jedná o výsledky kontroly s nejvyšší nespecifickou reakcí bazofilů.

Přímý basofilní test (Shelleyův test). Tento test je založen na studiu morfologických změn v bazofilech periferní krve pacienta s alergickým onemocněním při interakci se specifickým alergenem. Vyhodnocení reakce se provádí podobně jako hodnocení s nepřímým bazofilním testem.

Reakce poškození granulocytů (RPG), indexu poškození neutrofilů (PPN), reakce uvolňování draslíku z leukocytů, enzymů atd. V rámci tohoto přístupu existuje velké množství metod. Izolované leukocyty se například inkubují s roztokem alergenu po určitou dobu, po které se zaznamená poškození neutrofilů:

- morfologicky: změnou morfologie barvením trypanovou modří, ethidiumbromidem atd. (poškozené / mrtvé buňky jsou zbarveny);

- fotometricky: zvýšení koncentrace draslíkových iontů se stanoví na plamenovém fotometru, uvolnění myeloperoxidázy se stanoví fermentací substrátu-chromogenu a změnou barvy roztoku na tabletovém fotometru.

Reakce uvolňování histaminu z lidských periferních krevních bazofilů je založena na zohlednění uvolňování histaminu po léčbě bazofilních buněk specifickými alergeny. Stimulanty uvolňování histaminu z buněk jsou alergeny, anti-IgE, C5a. Řada cytokinů - IL-3, IL-5, CSF-GM - zvyšuje uvolňování histaminu bazofily. Test byl použit k identifikaci stupně senzibilizace organismu in vitro s kopřivkou, atopickou dermatitidou a experimentálními studiemi.

Testy nedoporučené pro použití a / nebo interpretaci:

1. Definice IgG, včetně IgG4 (kromě případů, kdy je to důležité).

2. Kineziologie (metrie) - kontakt (demonstrace) pacienta s alergenem a současné měření relativní svalové síly. Pokud je nalezen alergen, je síla snížena. Je-li zjištěno specifické antidotum, obnoví se.

3. VEGA (elektrotermometrie, Vollův test) - měření odolnosti kůže (tkáně) mezi akupunkturními body při současném kontaktu (demonstrace) s alergenem. Existují komerční zařízení a testovací systémy.

4. Aurikulocardial reflex - měření parametrů plnění / pulsu, atd. V okamžiku kontaktu s alergenem.

5. Test provokace-neutralizace: produkce kůže nebo jiných vzorků s postupným zvyšováním koncentrace alergenu pro dosažení výrazné reakce. Tedy nalezení řešení koncentrace. Následně vložte vzorek a postupně snižujte koncentraci alergenu, dokud reakce nezmizí. Tato koncentrace může být použita pro specifickou desenzibilizaci.

6. Analýza krevní reakce: kapka krve se smísí s roztokem alergen / potravina atd. Po určité době se změny v experimentálním poklesu porovnávají mikroskopicky s kontrolou.

7. Alergie na iridologii.

8. Diagnostika alergií na zhoršenou cirkulaci různých mystických forem energie lidského těla nebo ducha.

http://med-books.info/immunologiya-allergologiya_745/metodyi-diagnostiki-vitro.html

Nové směry v diagnostice alergických onemocnění

V současné době je problém alergických onemocnění velmi akutní vzhledem k jejich šíření, zejména výskyt alergické rýmy se stává epidemií [3, 6, 8]. Není náhodou, že domácí škola alergologů, kterou vytvořil A. D.

V současné době je problém alergických onemocnění velmi akutní vzhledem k jejich šíření, zejména výskyt alergické rýmy se stává epidemií [3, 6, 8]. Není náhodou, že domácí škola alergiků, kterou vytvořil A.D. Ado, věnovala velkou pozornost a pozornost prevenci a diagnostice alergických onemocnění [3].

Pro preventivní a diagnostické účely by měla být přijata následující opatření: t

  • historie;
  • laboratorní diagnostika alergických onemocnění: skarifikační, pichnutí a kontaktní kožní testy, intradermální testy, stanovení obecných a specifických imunoglobulinů (Ig) E, cytometrický alergen-stimulační buněčný test (CASK-test), buněčný test na uvolnění mediátorů, test na inhibici přirozené emigrace leukocytů (TTEEL), měřený zátěžový test pro diagnostiku fyzické kopřivky;
  • Cytologické a bakteriologické vyšetření nosních a hltanových nátěrů;
  • dispenzární pozorování ve zdravotnickém zařízení, včetně přítomnosti lékařské karty nebo anamnézy, pasu pacienta s alergickým onemocněním;
  • odstranění alergenů, což naznačuje:

- používání čističů vzduchu, speciálních vysavačů;

- použití činidel pro kontrolu roztočů (acarosan, milbiol, acaril, acarex test);

- výměna polštářů, přikrývek, matrací ze syntetických, použití speciálních potahů na matrace, povlečení na polštáře, přikrývky, zabraňující kontaktu s mikroby;

- změna bydliště po dobu vystavení alergenům (zejména pylovým alergenům);

- dodržování hypoalergenní stravy.

Tato opatření vám umožní diagnostikovat alergické onemocnění v rané fázi, což přispívá k prevenci a účinné léčbě této patologie.

Podle různých autorů 10–30% populace trpí alergickými onemocněními v různých zemích. Podle Státního výzkumného centra Moskevského institutu pro imunologii se přibližně 40 000 pacientů ročně snaží o ambulantní léčbu alergií. V posledních letech bylo pozorováno zvýšení výskytu pollinózy, alergické rýmy.

Díky objevu S. Johanssona a H. Bennicha z roku 1967 imunoglobulinů třídy E (IgE) byly vytvořeny testovací systémy pro stanovení běžných a alergen-specifických IgE. Tento typ testů nezmenšuje význam skarifikace kůže a prick testů, používá se k určení alergenů významných pro příčiny před alergenně specifickou imunoterapií (ASIT). U určité kategorie pacientů (pacienti s alergickou dermatózou, pacienti užívající antihistaminika nebo kortikosteroidy, děti s nízkou prahovou citlivostí na kůži, těhotné ženy s nespecifickou citlivostí na kůži) je obtížné provádět kožní testy. Alergické reakce ve vývojovém mechanismu, jehož se účastní IgE, se nazývají true nebo zprostředkované IgE.

Výběr zkušebních systémů různé produkce pro stanovení alergen-specifické a celkové IgE kvantitativní nebo semikvantitativní metody založené na enzymové imunoanalýze (ELISA) nebo chemiluminiscenčním MAST-testu je v současné době poměrně široký. Kvantitativní metoda je dobře stanovena pro stanovení celkového IgE. V semikvantitativní metodě se v závislosti na intenzitě reakce hodnotí alergen-specifické IgE podle tříd přibližně odpovídajících kožním testům (stupeň 1 - nízká intenzita; stupeň 2 - střední; 3 - vysoký; stupeň 4 - velmi vysoký). Intenzita reakce 1. třídy se nebere v úvahu jako pozitivní výsledek.

Podle mnoha výzkumníků je test MAST (společnost Lumineri) citlivější a specifičtější, umožňuje rychle získat výsledky studie, umožňuje stanovit potřebné parametry i u jednoho pacienta, aniž by čekal na soubor vzorků. Jedním příkladem kvantitativní metody jsou takové testovací systémy (Biokhimmak), pomocí kterých můžete pomocí kalibrační křivky určit kvantitativní parametry IgE specifického pro alergen.

Výsledky kožních testů se ne vždy shodují s výsledky stanovení specifického IgE, což je spojeno s komplexnějšími mechanismy tvorby kožní reakce. Podle L. A. Goryachkiny, A. S. Demborinskaya, paralelní studie výsledků kožních testů a testu MAST ukazují vysokou korelaci (tabulka) [2].

Rozdíl mezi výsledky kožních testů a testu MAST se týká plísňových a potravinových alergenů, což může být způsobeno složitějšími mechanismy reakcí na tyto alergeny. Podle L. V. Lusse byly v 6,4% případů pozorovány falešně pozitivní výsledky při použití testu MAST, což je pravděpodobně spojeno se zkříženě reagujícími alergeny [4].

V roce 1967 byly kontaktní kožní testy standardizovány mezinárodní skupinou autorů [11]. Kontaktní dermatitida se týká hypersenzitivních reakcí typu IV (hypersenzitivita zpožděného typu) a při jejím vývoji probíhá fáze indukce (senzibilizace) a klinických projevů. Role alergenů zde může být prováděna nízkomolekulárními proteiny, kovovými solemi, hapteny, léky. Senzitizované Th-1 (CD4 + buňky) produkují y-interferon (IFN), který vede k aktivaci keratinocytů, expresi HLA-DR, intracelulárních adhezivních molekul - ICAM-1 antigenů, produkci interleukinu-2 (IL-2) a dalších prozánětlivé cytokiny, vazodilatace a rozvoj lokálního zánětu. Při kontaktních kožních testech jsou chemické látky (alergeny, síran nikelnatý, neomycin, formaldehyd atd.) Zabudovány na gelových destičkách (polyvinylpyrrolidon, hydroxypropylcelulóza), které jsou fixovány na zádech pacienta. Standardní destička obsahuje 24 alergenů (lékárna), účinná dávka se měří v µg / cm2. Pro kontakt s kapalnými alergeny rozpuštěnými v petrolátu nebo oleji, vodě atd. Byly vyvinuty speciální proužky. Při alergické dermatitidě přetrvává kontakt s alergenem s kůží po dobu 48 hodin, po kterém proužky odstraní a analyzují výsledek (velikost plaku v místě kontaktu). Hodnocení reakce se provádí následujícím způsobem: - žádná reakce; ± - pouze erytém; + - erytém a infiltrace; - erytém a ne více než tři papuly; +++ - erytém a více než čtyři papuly; ++++ - erytém a velký počet výrazných papul; +++++ - erytém, váčky. Test se používá k diagnostice dospělých a dětí. Čas čtení výsledků se může pohybovat od 48 hodin do 7 dnů (pozdní reakce). Skutečná alergická reakce vzniká během 72–96 hodin [11].

V naší zemi byly vyvinuty a aplikovány vzorky kapiček a aplikovány, když byla na kůži předloktí aplikována kapka alergenu nebo kus gázy ošetřené alergenem, předem ošetřená 70% alkoholem [3].

Potravinová nesnášenlivost mléka, vajec, ryb je způsobena protilátkami IgG4 [3]. Proto je velmi důležitá diagnóza alergických reakcí zprostředkovaných IgG (hypersenzitivní reakce typu II a III), často označovaná jako intolerance potravy nebo léků, na rozdíl od potravin a lékových alergií zprostředkovaných skutečnými IgE. Přítomnost onemocnění gastrointestinálního traktu (GIT) přispívá k tvorbě intolerance potravy a léků: gastritida, chronická cholecystitida, chronická pankreatitida, kolitida, střevní dysbióza. Stanovení IgG protilátek proti potravinářským produktům metodou ELISA (BIOCHIMMAK, Allergofarma) je také vhodné pro rekurentní urtikárii, atopickou dermatitidu, v přítomnosti současných gastrointestinálních onemocnění. Při celiakii je pozorována potravinová nesnášenlivost produktů obsahujících gluten (protein gliadinu).

Vývojový mechanismus zahrnuje aktivované T-buňky, které produkují IL-2 a další cytokiny (y-IFN, faktor nádorové nekrózy (TNF-a), IL-1), specifické IgG, IgM a IgA protilátky jsou syntetizovány, což vede k zvýšená propustnost a poškození sliznice a dále rozvoj atrofie [1].

Reakce zprostředkované skutečným IgE mohou být v klinické symptomatologii podobné pseudoalergickým reakcím, které se liší mechanismem vývoje: nesouvisí s tvorbou protilátek ani s účastí senzibilizovaných lymfocytů. V patogenezi těchto reakcí se rozlišují pouze dva stupně - patchemické a patofyziologické [3]. Při pseudoalergických reakcích dochází k nespecifickému uvolňování mediátorů: histamin, leukotrieny, prostaglandiny. Látka což vede k uvolňování neurotransmiterů, se nazývají gistaminoliberatorov: 48/80 látka, polyaminy, látka v kompozici kterých jsou NH-skupina nebo alifatická vazba N-geksadefilamid, antibiotika (polymyxin), ionofory vápníku, doplňují fragmenty, krevních náhrad, helminthů odpadní produkty [3].

Pro diagnózu pseudoalergických reakcí byly navrženy testy CAX-testu a uvolňování buněčných mediátorů (FLOW-CAST a EK-CAST). A. L. DeWeck, M. L. Sanz (2002) ukázal, že když jsou bazofily aktivovány alergenem, antigeny CD63 jsou exprimovány na jejich povrchu [7]. V testu FLOW-CAST (Buhlmannovy laboratoře) se používá dvojité označení, izolují se leukocyty a inkubují se stimulačním pufrem a alergenem, k identifikaci bazofilů se používají monoklonální protilátky anti-IgE (MAT) s fluorescenční značkou a poté se přidá CD63 MAT a na povrchu bazofilů se stanoví exprese CD63 antigenů průtokovou cytometrií. Například u potravinových a inhalačních alergenů je test považován za pozitivní, když je CD63 exprimován na povrchu ≥ 15% bazofilů; pro jedy hmyzu -> 10%; beta-laktamová antibiotika a analgetika - ≥ 5% bazofilů a stimulační index ≥ 2. Index stimulace se rovná poměru% CD63 + bazofilů ve vzorku s alergenem k počtu těchto buněk ve vzorku bez alergenu. K dispozici je analogový test FLOW-CAST - BASOTEST (Beckton-Dickinson). CASK test je specifický pro stanovení IgE-zprostředkované alergie na inhalované alergeny (kožní testy nelze provádět), pyly [14], léky: β-laktamová antibiotika [9], svalová relaxancia [5], analgetika [5, 12], s alergiemi latex, bodnutí hmyzem hymenoptera [7], s pseudoalergickými reakcemi na protizánětlivé nesteroidní léky [12], indukované komplementovými složkami, plazma, pro stanovení autoprotilátek proti IgE [15]. Výsledky testu CASK (FLOW-CAST) dobře korelují s výsledky kožních testů.

EC-CAST je založen na stanovení sulfoleukotrienů (LTC)4, LTD4, LTE4), produkty rozkladu kyseliny arachidonové, transformované 5-lipogenázou a glutathion-C-transferázou po vystavení alergenů buňkám. Sulfolikrieny mohou být syntetizovány bazofily, žírnými buňkami, makrofágy, eosinofily, buňkami mesengialů ledvin nejen v alergických reakcích zprostředkovaných IgE, ale také v zánětlivých procesech, intoleranci léků a potravin a pseudoalergických reakcích. Syntetizovány buňkami LTC4 metabolizuje na vzdělávání LTD4 a LTE4.

Sulfolikrieny mohou být stanoveny v různých biologických tekutinách pomocí ELISA. Test se považuje za pozitivní pro potraviny, inhalační alergeny, latex, hmyzí jedy při určování hladiny leukotrienů ≥ 200 pkg / ml; pro lékové alergeny, stejně jako potravinářské a chemické přísady ≥ 40 pkg / ml.

Popsané testy jsou vysoce specifické pro diagnostiku potravinových alergií a nesnášenlivosti, inhalační alergie, když nelze použít kožní testy; alergie na latex, bodnutí s hymenoptera; alergie u dětí, alergie na léky a nesnášenlivost, různé pseudoalergické reakce.

Současné použití obou testů (CAST-COMBI) je možné pro diagnózu alergie na léky, intoleranci na potraviny a léky, pseudoalergické reakce, kdy jsou v supernatantu stanoveny sulfoleukotrieny a na bazofily - exprese antigenů CD63 [13]. Tento přístup umožňuje v průměru zvýšit citlivost a specifičnost studie až o 20%. Test CASK a buněčný test uvolňování mediátorů lze použít při diagnostice potravinových alergií a intolerance, pseudoalergických reakcích a při přípravě hypoalergenní a eliminační diety.

Literatura
  1. Belmer S.V. Celiakie // karcinom prsu. 1996. svazek 4. č. 3.
  2. Goryachkina L. A., Demborinskaya A. S. Stanovení celkového a specifického IgE v krevním séru alergických pacientů chemiluminiscencí pomocí zařízení MAST-CLA od firmy LUMINERY / Moderní problémy alergologie, klinické imunologie a imunofarmakologie: materiály sympozia „Nejnovější metody diagnostiky alergií“ 29. - 31. května 2001, Moskva. Str. 13–17.
  3. Clinical Allergology / ed. R. M. Khaitova. M.: MEDpress-inform, 2002. 623 str.
  4. Luss L.V. Komparativní hodnocení diagnostického významu různých metod specifické alergické diagnózy u pacientů s atopickými chorobami / Aktuální problémy alergologie, klinické imunologie a imunofarmakologie: materiály sympózia "Nejnovější metody diagnostiky alergie" 29. - 31. května 2001, Moskva. Str. 7-8.
  5. Abuaf N., Rajoely B., Ghazouani E. et al. Ocenění cytometrické in vitro aktivace bazofilů in vitro aktivací pro diagnostiku svalové relaxantní alergie // J. Alergie. Clin. Immunol. 1999; 104: 411–418.
  6. Almqvist C., Pershagen G., Wickman C. M. Socioekonomický status a riziko astmatu a senzibilizace ve čtyřech letech v kohortě narození. Abstraktní kniha XXIII. Kongresu EAACI, 12. - 16. června 2004, Amsterdam. Redaktoři: Roy Gerth van Wijk a kol. 2004; 961: 283.
  7. De Weck A.L., Sanz M.L. Průtokový cytometrický stimulační test buněčného alergenu. Technické a klinické hodnocení alergie a pseudoalergie // ACI International. 2002; 14: 5: 204–215.
  8. Emanius, G.E., Wickman C.M. Abstraktní kniha XXIII. Kongresu EAACI, 12. - 16. června 2004, Amsterdam. Redaktoři: Roy Gerth van Wijk al. 2004; 52: 22.
  9. Gamboa P. M., Sanz M. L., Garcia-Aviles C. a kol. Průtokový cytometrický buněčný alergenový stimulační test pro alergické pacienty na alergiky s anti-negativním negativním kožním testem // Alergie. 2001; 56: 68: 5.
  10. Jahansson S. G. O., Bennich H. Imunologické studie atypického imunoglobulinu (myelomu) // Imunologie. 1967; 13: 381–394.
  11. Lashapelle J. M., Maibach H. I. Testování záplat a prick test. Praktický průvodce. S příspěvkem J. Ring. Ed. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 2003; 189.
  12. Sabbah A., Drouet M., Sainte-Laudy J. a kol. Appar de la cytometrie en flux dans le diagnostergologique // Alergie. Immunol. 1995; 29: 15–21.
  13. Sanz, M.L., Gamboa, P.M., De Weck, A.L. Klinické hodnocení, ACI International. 2002; 14 (5): 185–193.
  14. Siraganian H.P. Sekrece histaminu ze žírných buněk a bazofilů // Trends Pharmacol. Sci. 1983; 4: 432–437.
  15. Wedi B., Novacovic V., Koerner M., Kapp A. Chronické sérum urtikárie indukuje uvolňování histaminu, produkci leukotrienu a bazofil CD63 - inhibiční účinek protizánětlivých léčiv // J. Alergie. Clin. Immunol. 2000; 105: 552–560.

TP Marková, MD, profesorka
IPK Federální biomedicínská agentura, Moskva

http://www.lvrach.ru/2006/04/4533741/

Musí test na alergie

Společnost Hitachi Chemical Diagnostics, Inc. (HCD) byla první společností, která vyvinula vícenásobný alergický sorbentní test (MAST) s použitím chemiluminiscenční analýzy pro stanovení hladiny specifického IgE. Alergotest MAST má nesporné výhody oproti jiným metodám diagnostiky alergií in vitro; malý objem séra (0,75 ml), který umožňuje současné stanovení až 36 alergenů, bezpečnost a spolehlivost technologie chemiluminiscenční analýzy, vysokou specificitu a citlivost, rychlost reprodukce, velký rozsah zkoumaných alergenů.

Produkty HCD jsou úspěšně používány ve zdravotnických zařízeních ve více než 40 zemích světa a umožňují lékařům přístup k nejnovějším technologiím.

V Rusku jsou výrobky HCD zastoupeny společností Lumineri od roku 1998. Pro vytvoření diagnostického alergenního složení panelů MAST, přední odborníci - alergici a imunologové z Ruska pečlivě studovali asi 14 000 klinických případů a vybrali pouze alergeny charakteristické pro ruské podmínky. Na vývoji se podílely přední odborníci z Vědecko-výzkumného ústavu pediatrie Ministerstva zdravotnictví Ruské federace, Ústřední klinické nemocnice UDP Ruské federace, RMAPO.

Společnost HCD, která neustále zavádí inovativní technologie do výroby testů alergií na MAST, představuje novou technologii OPTIGEN založenou na MAST, která ztělesňuje nejnovější vědecký pokrok v oblasti diagnostiky alergií in vitro.

Hlavní součástí technologie OPTIGEN je malá plastová zkušební komora, high-tech zařízení - tzv. Panel. Tento panel se skládá ze tří částí: tělesa panelu, krycího skla a přepážky. Krycí sklo se skládá z jednotlivých buněk se sorbovanými alergeny na vnitřní straně a optickými čočkami na vnější straně pro zvýšení a zaměření světelného toku.

Hlavní součástí technologie OPTIGEN je malá plastová zkušební komora, high-tech zařízení - tzv. Panel. Tento panel se skládá ze tří částí: tělesa panelu, krycího skla a přepážky. Krycí sklo se skládá z jednotlivých buněk se sorbovanými alergeny na vnitřní straně a optickými čočkami na vnější straně pro zvýšení a zaměření světelného toku.

Sérum získané z krevního vzorku pacienta se odsaje do testovací komory panelu. Sérový alergen IgE se váže na specifické alergeny, které jsou sorbovány uvnitř těla panelu. Dále se do panelu přidají reagencie, které generují světelný signál různé intenzity v poměru a v závislosti na množství alergenu specifického IgE ve vzorku pacienta. Světlo panelu se měří pomocí luminometru CLA-1, výsledky se automaticky vytisknou na vestavěnou tiskárnu.

Výhody vícenásobného testování MAST OPTIGEN:

  • absolutní bezpečnost pro pacienta a lékaře;
  • možnost širokého využití v pediatrii;
  • nejvyšší přesnost a spolehlivost výsledku díky technologii chemiluminiscenční analýzy;
  • trojitý kontrolní systém (včetně ovládacího panelu pro testování přístroje, 2 kontrolní závity na každém panelu pro hodnocení kvality činidel, kontrolních sér);
  • stanovení minimálních koncentrací specifického IgE (od 0,52 ng / ml nebo 0,22 LU / ml);
  • schopnost stanovit až 180 alergenů u 5 pacientů během 8 minut;
  • obdržení výsledků analýzy v den výroby;
  • minimální množství séra - od 300 μl;
  • jednoduchost, snadnost a spolehlivost při manipulaci (nedostatek matric, zkumavky);
  • kompletní sada panelů OPTIGEN se všemi potřebnými činidly (pufr, konjugát s rozpouštědlem, fotoreagentní složky);
  • 1 letá záruka na zařízení, možnost dlouhodobého skladování panelů a reagencií OPTIGEN;
  • plně automatická studie panelů OPTIGEN v luminometru CLA-1 s tiskem informací ve vhodné formě;
  • úplnou nezávislost na laboratorní základně. Zařízení CLA-1 lze snadno instalovat jak do diagnostické laboratoře, tak do ordinace odborného lékaře: alergologa, pulmonologa, pediatra, oftalmologa, dermatologa, gastroenterologa nebo jakéhokoliv jiného odborníka;
  • schopnost vytvářet jednotlivé studie (jeden panel pro jednoho pacienta) bez zvýšení nákladů na test;
  • vysoká spolehlivost systému a bez nutnosti opakovaných testů;
  • pohodlná kombinace alergenů v ruských panelech OPTIGEN;
  • není nutná komplexní údržba zařízení, což je důležité pro pozáruční dobu;
  • možnost připojení zařízení k počítači a vytvoření archivu dat;

Složení panelů alergenů MAST OPTIGEN

OPTIGEN Ruský jazyk l

  1. Pampeliška
  2. Palina
  3. Quinoa
  4. Hazel (pyl)
  5. Bílá bříza
  6. Černá olše
  7. Aspergillius
  8. Cladosporium
  9. Šváb mix I mix
  10. Domácí prach
  11. Timothy
  12. Kostřava luční
  13. Ježek tým
  14. Žito (pyl)
  15. Kuře
  16. Kukuřice (jídlo)
  17. Jablko
  18. Jahody
  19. Pšenice (jídlo)
  20. Brambory
  21. Mrkev
  22. Cod
  23. Hovězí maso
  24. Vepřové
  25. Rajčata
  26. Celé vejce
  27. Mléko
  28. Lískový ořech (jídlo)
  29. Sója
  30. Hrach
  31. Kuřecí peří
  32. Pes (epid.)
  33. Kůň (epid.)
  34. Kočka (epid.)
  35. Mite farina
  36. Roztoč pteronissinus

OPTIGEN Ruština IV

  1. Pampeliška
  2. Palina
  3. Quinoa
  4. Bílá bříza
  5. Černá olše
  6. Alternaria
  7. Candida
  8. Mukore
  9. Aspergillius
  10. Cladosporium
  11. Penicillium
  12. Šváb mix I mix
  13. Domácí prach
  14. Timothy
  15. Kostřava luční
  16. Žito (pyl)
  17. Kuře
  18. Oves
  19. Jablko
  20. Jahody
  21. Pšenice (jídlo)
  22. Brambory
  23. Mrkev
  24. Cod
  25. Hovězí maso
  26. Vepřové
  27. Rajčata
  28. Celé vejce
  29. Mléko
  30. Lískový ořech (jídlo)
  31. Sója
  32. Kuřecí peří
  33. Pes (epid.)
  34. Kočka (epid.)
  35. Mite farina
  36. Roztoč pteronissinus

OPTIGEN Inhalace

  1. Alder
  2. Hazel (pyl)
  3. Bílá bříza
  4. Palina
  5. Timothy
  6. Žito (pyl)
  7. Jitrocel
  8. Popelník
  9. Penicillium
  10. Alternaria
  11. Cladosporium Aspergillus
  12. Křeček (epid.)
  13. Morče (epid.)
  14. Králík (epid.)
  15. Kůň (epid.)
  16. Kočka (epid.)
  17. Pes (epid.)
  18. Klíště, farina
  19. Roztoč, pteronissinus

OPTIGEN jídlo

  1. Krab
  2. Cod
  3. Mrkev
  4. Jablko
  5. Brambory
  6. Rajčata
  7. Celer
  8. Peach
  9. Vlašský ořech
  10. Arašídy
  11. Lískový ořech
  12. Mandle
  13. Sója
  14. Žito
  15. Pšenice
  16. Sezamová semena
  17. Kazein
  18. Mléko
  19. Vajíčko bílé
  20. Vaječný žloutek

OPTIGEN Atopický

  1. Roztoč, pteronissinus
  2. Klíště, farina
  3. Aspergillius
  4. Cladosporium
  5. Kůň (epid.)
  6. Pes (epid.)
  7. Kočka (epid.)
  8. Timothy
  9. Palina
  10. Bílá bříza
  11. Hazel (pyl)
  12. Vajíčko bílé
  13. Mléko
  14. Cod
  15. Pšenice
  16. Sója
  17. Arašídy
  18. Jablko
  19. Mrkev
  20. Latex
http://www.luminery.ru/%D0%B0%D0%BB%D0%BB%D0%B5%D1%80%D0%B3%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B3 % D0% B8% D1% 8F /
Více Články O Alergenech