Moderní metody specifické diagnostiky alergických onemocnění

V posledních 20-30 letech se stále více projevuje růst alergických onemocnění a podle prognóz Světové zdravotnické organizace (WHO) v 21. století zaujmou vedoucí postavení v prevalenci všech nemocí. Mezi hlavní příčiny tohoto zvýšení výskytu patří nepříznivá ekologická situace, změna kvality výživy, vysoké zátěžové zátěže, nekontrolované užívání antibiotik a zhoršující se genetická zásoba.

Alergická onemocnění jsou ve svých projevech velmi různorodá, často se skrývají pod rouškou jiných nemocí, jako je nachlazení nebo kůže, takže včasná a přesná diagnóza hraje klíčovou roli v tom, jak účinná bude léčba a jak se kvalita života pacienta nakonec změní.

Diagnostika alergických onemocnění se provádí v několika fázích:

  • sběr alergické historie;
  • všeobecné klinické a laboratorní vyšetření;
  • specifická klinická alergická diagnostika (provádění kožních alergických testů a / nebo provokační testy s alergeny);
  • alergické a imunologické vyšetření (stanovení hladiny celkového a specifického IgE).

Sběr alergologických anamnéz a vyšetření pacienta umožňuje identifikovat fakta a znaky indikující alergickou povahu onemocnění, což musí být potvrzeno specifickými vyšetřovacími metodami.

Umístění kožních testů je charakterizováno zavedením alergenu přes kůži a hodnocením velikosti a povahy vyvinutého edému nebo zánětlivé reakce (prick test, intradermální test, aplikační test a test skarifikace).

V případě nesrovnalostí mezi údaji o anamnéze a výsledky kožního testování se používají provokativní testy (inhalace, nos, spojivky a výživa).

Vzhledem ke zvýšenému riziku systémových reakcí provádí všechny kožní a provokativní testy pouze alergolog-imunolog, který je odborně způsobilý k provádění tohoto postupu ve specializované alergologické nemocnici nebo ordinaci. Navzdory širokému využití této metody diagnózy má řada kontraindikací, mezi nimiž patří: rozhodující význam hraje věk pacienta a jeho individuální zdravotní stav (přítomnost somatické patologie ve fázi dekompenzace, potřeba stálého příjmu antihistaminik a hormonálních přípravků atd.).

V tomto ohledu in vitro alergická diagnóza, která se vyznačuje absolutní bezpečností pro pacienta a jednoduchostí provedení studie, a má také několik výhod, získala širší uplatnění:

  • žádné kontraindikace pro vyšetření;
  • nezpůsobují další senzibilizaci, neexistuje riziko anafylaktických reakcí;
  • žádné věkové omezení, je možné provádět ve velmi raném věku;
  • jakýkoliv počet testovaných alergenů, detekce polyvalentní senzibilizace;
  • použití séra pro výzkum v jakékoliv laboratoři (testy na dálku).

Účelem tohoto typu diagnózy alergických onemocnění je stanovení hladiny IgE (celkového IgE a specifického IgE) v lidském séru, zvýšení, které indikuje přítomnost atopie u pacienta a možný rozvoj alergické reakce. Význam každé z podtříd protilátek třídy E by však měl být jasně pochopen.

Zvýšení hladiny celkového IgE může nastat u řady dalších patologií, které nemají alergickou povahu, například při parazitických invazích. V takových případech získává stanovení specifického IgE důležitou roli, která umožňuje identifikovat alergen způsobující závažnou příčinu nebo jeho nepřítomnost a nakonec provést správnou diagnózu a předepsat vhodnou léčbu. Proto je důležité mít na paměti následující hlavní indikace pro stanovení celkového IgE a specifického IgE.

Stanovení celkového IgE:

  • primární diagnóza atopie;
  • diagnóza infekce helminth;
  • diagnostika stavů imunodeficience;
  • diagnóza hyper-IgE syndromu a IgE-myelomu;
  • diferenciální diagnostika alergických onemocnění mezi různými patologiemi podobnými v klinické symptomatologii (chronická rýma a dermatitida, častá onemocnění dýchacích cest atd.).

Reagenční souprava "ELISA-total IgE" společnosti "Alkor Bio" umožňuje stanovit obsah celkového imunoglobulinu E v lidském séru metodou enzymového imunosorbentního testu. Sada má všechny nezbytné vlastnosti pro získání spolehlivého a spolehlivého výsledku, který pomůže při výběru další taktiky řízení pacientů.

Stanovení specifických IgE:

  • nutnost vyjasnit alergen významný pro příčiny ve všech případech, zejména při sporných výsledcích kožního testování;
  • diferenciální diagnostika alergických a nealergických (pseudoalergických) onemocnění;
  • obtížnost nebo nemožnost provádět testy in vivo;
  • detekce latentní (subklinické) senzibilizace - detekce vysokých hladin specifických IgE protilátek v nepřítomnosti klinických projevů indikuje zvýšené riziko alergických reakcí na tyto alergeny;
  • monitorování koncentrace IgE během specifické imunoterapie.

Metody používané v alergické diagnostice in vitro, založené na výsledcích imunotestu. V současné době existují 2 základní testovací systémy pro stanovení specifického IgE metodou ELISA.

První metodou je alergický test (alergen se sorbuje na „pevné fázi“ - mikrotitrační destička, papírový disk, nitrocelulózová membrána) Tato metoda se váže na alergen jak IgE, tak imunoglobuliny jiných tříd, například IgG (viz obrázek 1). Z toho důvodu má rozhodující význam sorpční kapacita pevné fáze, na které bude záviset přesnost výsledku, přičemž testovací systémy tohoto provedení jsou charakterizovány neúplným hodnocením úrovně specifického obsahu IgE. th e panely alergeny (velikost skvrna) a neschopnost plně automatizovat analýzu testovacích systémů na discích.

Obr.1 Schéma testu alergie.

Druhou metodou je reverzibilní test alergického sorbentu („zachycení“ možnosti enzymového imunotestu). Protilátky proti IgE jsou imobilizovány na pevné fázi a alergen je v kapalné biotinylované formě, v důsledku čehož dochází k eliminaci zkřížených reakcí s jinými skupinami imunoglobulinů a úplného navázání protilátek na IgE a alergenů se specifickým IgE v pacientově séru (obrázek 2).

Obr.2 Schéma reverzního alergicko-sorbentního testu ("zachycení" varianty ELISA).

Kromě toho se tato technika v kapalné fázi snadno přizpůsobuje automatizovaným systémům pro výrobu imunologických analýz, nevyžaduje, jako je tomu v případě výzkumu na discích s pevnou fází, speciální pádla pro promývací postup a také umožňuje měření optické hustoty vzorku na spektrofotometru při vlnové délce 450 nm. a 405 nm, což zvyšuje přesnost analýzy a rozšiřuje rozsah detekovatelných koncentrací specifického IgE.

Tato metoda je plně implementována v reagenční soupravě „Allergo IFA-specific IgE“ určená pro kvantitativní stanovení alergen-specifických imunoglobulinů E v lidském krevním séru metodou enzymově vázané imunosorbentní analýzy domácího výrobce činidel pro ELISA Alkor Bio.

Alergy produkované Alkor Bio jsou prezentovány ve skupinách, z nichž lze rozlišit potravinové alergeny, pylové alergeny, alergeny pro domácnost, epidermální alergeny a živočišné bílkoviny, louky a plevele a také směsi alergenů.

Stanovení specifických IgE na tyto alergeny, jako nejčastější příčina vzniku alergických onemocnění, značně usnadní práci alergologa-imunologa a pomůže při jmenování specifické imunoterapie.

Sada s vysokou specificitou a citlivostí, stejně jako kvantitativní hodnocení výsledku, vám umožňuje identifikovat senzibilizaci pacienta na specifický alergen. Testovací systém má registrační osvědčení Ruské federace, které umožňuje použití v Rusku.

Vývoj technologií ELISA tak významně rozšířil diagnostiku alergických onemocnění, což přineslo neocenitelnou pomoc při identifikaci alergií u pacientů a následném jmenování specifické imunoterapie.

Safin V.R., LLC "Alkor Bio", Petrohrad.

http://medimm.ru/2015-08-19-11-47-01/117-sovremennaya-allergodiagnostika

Alergické testy

Testy alergie a alergie Diagnostika

Diagnóza alergie je laboratorní technika pro identifikaci příčiny senzibilizace těla. Alergické testy se provádějí imunologickou metodou a kožními testy. Pro stanovení konečné diagnózy jsou zohledněny výsledky vyšetření, klinický obraz onemocnění, alergická a dědičná historie.

Imunologická metoda

Pro identifikaci příčiny senzibilizace organismu je sérologická diagnostika častěji používána metodou ELISA (enzymová imunosorbentní zkouška). Pro tuto studii provádějte odběr vzorků žilní krve na prázdný žaludek ráno. V periferní krvi jsou detekovány specifické protilátky - imunoglobuliny třídy E (Ig E) a G (Ig G). Specifické protilátky jsou syntetizovány imunitním systémem, když alergen vstoupí do těla přes dýchací trakt, zažívací trakt, sliznice a kůži.

IgE vzniká během alergické reakce s okamžitým typem odpovědi - klinické příznaky se objevují během 5-120 minut po kontaktu s alergenem. Ig G se syntetizuje v alergické reakci s opožděným typem, když se charakteristické symptomy onemocnění objeví 24 až 72 hodin po kontaktu s alergenem. Imunologická metoda je méně citlivá než kožní testy. Výhoda - může být podávána dětem mladším 5 let při užívání antihistaminik v akutní fázi onemocnění.

Kožní testy


Kožní testy jsou předepsány po konzultaci s alergikem a stanovení sady potřebných testovacích systémů. Pokud zjistíte senzibilizaci na jeden alergen, můžete předpokládat výskyt alergií na jiné alergeny, které mají druhově specifickou křížovou reakci. Tento přístup snižuje finanční náklady na diagnostiku a usnadňuje přípravu terapeutické stravy.

Typy kožních testů.

  • Zkouška skarifikace se provádí během počáteční diagnózy senzibilizace těla. Škrábance s děrovačem nebo jehlou se provádějí na kůži na zádech nebo předloktí, po které se místo defektu kůže umístí kapalina obsahující testovací alergen. Výsledek analýzy je hodnocen za 15-20 minut.
  • Injekční test - charakterizovaný hlubším zavedením laboratorního alergenu do kůže. V oblasti předloktí položte několik kapek tekutého alergenu, které navíc propíchnou jehlu. Výsledek studie je hodnocen za 10-15 minut.
  • Intradermální test se provádí s klinickými příznaky alergie, ale s negativním výsledkem skarifikačních a injekčních testů. Kapalný sterilní alergen se podává subkutánní injekcí. Výsledek se vyhodnocuje za 5-7 minut.
Kožní testy se neprovádějí v aktivní fázi alergie při užívání antihistaminik a glukokortikoidů. U dětí mladších 5 let je diagnóza neinformativní.

http://patronage.ru/drugie_analizy/allergodiagnostika.html

Alergická diagnóza

Diagnostika Allergodia je složitý a časově náročný proces, protože není snadné určit, která z látek způsobuje alergické reakce. Alergie - přecitlivělost organismu na určité látky. To může nastat neočekávaně a být zděděn. Pokud jsou oba rodiče alergičtí, je možné převést až 80% na dítě. Podle statistik trpí touto chorobou každá pátá osoba. Tato vysoká míra je spojena se zvýšenou alergenickou zátěží na těle.

K určení alergenu v našem zdravotnickém centru můžete provést veškerý nezbytný výzkum.

Existuje několik typů alergií:

  • Respirační. Kauzálními činidly v tomto případě mohou být spory hub, pyl rostlin, prach, zvířecí chlupy, fragmenty roztočů.
  • Jídlo. Může se vyskytnout při jídle a při přípravě.
  • Hmyz. Kontakt s hmyzem (včely, komáry, vosy a další) a jejich kousnutí může způsobit alergickou reakci.
  • Drog. Vyvinuto na antibiotikách, analgetikách, inzulínu a mnoha dalších léčivech.
  • Infekční. V tomto případě jsou alergeny mikroby.
  • Dermální. Je výsledkem expozice kožním alergenům.

Příznaky alergie

Projevy alergií mohou být jak sezónní, tak celoroční. Poslední typ je způsoben alergeny, které jsou neustále v našem stanovišti. Sezónní přichází s různými ročními obdobími.

Příznaky alergií zahrnují:

  • otoky;
  • rýma;
  • kýchání;
  • slzení;
  • kopřivka;
  • kožní vyrážky;
  • senná rýma;
  • zarudnutí očí.

V těžkých případech může být bronchospasmus, křeče, angioedém, potíže s dýcháním, ztráta vědomí, člověk může jít do stavu anafylaktického šoku, kómatu nebo dokonce umřít.

U dětí se alergie projevuje ve formě: ekzémů, vyrážek, neurodermatitidy, abdominální distenze, abnormální stolice, regurgitace, střevní koliky, zvracení, dýchacích obtíží, kožních lézí, kongesce nosu.

Test alergie

Nejdříve se musíte poradit se zkušeným alergologem, který vám poskytne doporučení k analýze. Pro děti provádějte důkladnou diagnózu. Zpočátku spočívá ve shromažďování údajů o přítomnosti alergických onemocnění u příbuzných. Specifická alergická diagnóza je stanovení v plazmě imunoglobulinu E (IgE). Pokud má těhotná žena vysoký obsah IgE v pupečníkové krvi, je riziko atopických onemocnění velmi vysoké. Lékař také může určit některé indikace studie:

  1. exacerbace alergií nebo chronických onemocnění;
  2. infekce (např. SARS, angina);
  3. těhotenství;
  4. závažný stav pacienta;
  5. hormonální terapie;

Podle jednoho specifického alergenu mohou odborníci identifikovat skupinu látek, na které bude mít pacient alergickou reakci.

Průzkum je prováděn v několika etapách. Nejprve se provede inhalační test obsahující alergeny různých skupin. Pokud test prokázal pozitivní výsledek, pak je určena hlubší studie. Existuje několik možností pro jeho realizaci.

Krevní test Považován za vyšší náklady, ale méně citlivý. Pozitivní stránkou tohoto typu testu na alergie je, že může být použit k určení imunoglobulinu E.

Test na kůži Splněno v případě podezření, že určitý alergen nebo skupina způsobuje alergii. Kromě toho musíte lékaře informovat o užívaných drogách. Lze provést jednou ze tří metod:

  1. Skarifikace. Pro tento test jsou zářezy provedeny pomocí lancety tak, aby se roztok dostal do kůže. Pokud se objeví svědění nebo zarudnutí, znamená to, že na tuto látku existuje alergie.
  2. Injekční test se provádí následujícím způsobem: na kůži se umístí několik kapek alergenu. Pak se každá kapka propíchne jehlou. V tomto případě nebude trvat dlouho čekat, a pokud je alergie, to se projeví do 15 minut.
  3. Intradermální test se aplikuje pouze v případě, že injekce nedává výsledky. V tomto případě se alergen vstřikuje přímo pod kůži pacienta. Tato metoda může být základem pro systematickou alergickou reakci, a proto ji lékaři nepředepisují okamžitě, ale pouze v případě potřeby.

Testy provokativní a lékové alergie se provádějí pouze pod přísným dohledem lékařů v nemocnici. Provedení provokativního testu spočívá v tom, že se alergeny umístí přímo do orgánu citlivého na alergie: spojivky - odhalí alergickou konjunktivitidu; nosní - používá se k podezření na alergickou rýmu; inhalace - používá se k diagnostice bronchiálního astmatu, potravinových alergií.

Léčba alergií

První věc, kterou vám každý lékař řekne, je, že alergie nelze úplně vyléčit. Užívání léků a vedení správného životního stylu, můžete zapomenout na nemoc. Všechna léčiva jsou pro každého pacienta vybrána individuálně. Jedná se především o vitamíny, adsorbenty a desenzibilizační činidla a v závažných případech o hormony.

http://medi-center.ru/laboratornaya-diagnostika/allergodiagnostika

Laboratorní metody specifické alergické diagnózy

Tyto metody mohou být široce používány při alergických onemocněních v akutní fázi, během období masivního kontaktu s alergenem, s vysokou citlivostí pacientů na alergen, pokud jsou u dětí kontraindikace při identifikaci alergických onemocnění z povolání, protože vylučují možnost nespecifických, falešných alergických reakcí.

Z různých metod specifické alergické diagnostiky u reagenického typu závislého na IgE je výhodnější stanovení monoklonálního IgE.

Existují nepřímé metody stanovení IgE a nejběžnějších přímých metod pro detekci specifických IgE, založených na nových technologiích a využití diagnostiky ve formě standardizovaných a certifikovaných alergenů.

Reakce pasivního přenosu podle Proustlitze - Küstnera (nepřímý způsob kožních testů) se častěji používá v pediatrické praxi při identifikaci potravinových alergií. Podstata metody spočívá v reakci pasivního přenosu na příjemce senzibilizace intradermálním podáním 0,1 ml séra pacienta za přítomnosti předpokládaného specifického IgE v něm. Po 24 hodinách se do stejné oblasti vstříkne 0,02 ml domnělého alergenu. Reakce se zaznamenává po 20 minutách. Hrozba přenosu AIDS, virové hepatitidy a jiných infekcí však neumožňuje tuto metodu široce používat.

Specifická detekce IgE

Studie celkového IgE je prováděna pomocí papírového radioimunoanalýzy (PRIST metoda), stanovení alergie specifického IgE - radioalergosorbentního testu (metoda RAST). Spolu s nimi se stále více používá metoda ELISA (enzym-linked immunosorbent assay) ke stanovení alergie specifického IgE.

Metoda RAST je nejpřesnější a nejpřesnější, protože je založena na použití radioaktivního štítku. Její podstata spočívá ve spojení specifického IgE sledovaného séra s alergenem umístěným na papírové desce. Po praní nespecifických (celkových) IgE se do obsahu přidají protilátky značené proti IgE proti 125E. Výsledný radioaktivní komplex se odečítá na scintilačním počítači.

Metoda ELISA

Sérum subjektu, obsahující specifické IgE, je navrstveno na polystyrenový povrch mikrodestičky adsorbovanou sadou alergenů, které vážou pouze určité specifické IgE.

S bodovým imunotestem se alergeny aplikují ve formě teček na nitrocelulózových discích.

Pro stanovení koncentrace specifického IgE spojeného s alergenem se k IgE přidají anti-protilátky (značené enzymem). V další fázi je obsah specifického IgE ve svislém svazku v systému Uniskan nebo Multiscan stanoven pomocí speciálních činidel, která reprodukují barevnou reakci, jejíž intenzita závisí na koncentraci specifického IgE v kombinaci s alergenem. Normálně nepřekračuje 210 IU / jednotku.

Spolu s detekcí specifických IgE se používají další laboratorní testy k diagnostice jak na protilátkách závislých reakcích (stanovení ukazatelů specifického poškození bazofilů, alergických protilátek v pasivních hemaglutinačních reakcích, reakce fixace komplementu atd.) A reakcí zpožděného typu (reakce inhibice leukocytů krevní testy - RTML, test s buňkami tvořícími růžice - ROCK, test poškození neutrofilů atd.).

Jejich použití v alergické praxi neztratilo svůj význam - identifikace přecitlivělosti na alergeny, autoantigeny umožňují cílenější léčbu a rehabilitaci pacientů.

Reakce přímého specifického poškození krevních bazofilů

Krevní bazofily, žírné buňky - cílové buňky při provádění alergických reakcí okamžitého typu. IgE s pomocí Fc fragmentu je fixován na receptorech membrán těchto buněk a pomocí Fb fragmentu specificky reagují s alergenem. To je doprovázeno ostrou aktivací (degranulací) cílových buněk, která se používá jako marker alergické reakce.

Pro formulaci reakce se 5 ml testované krve přidá do centrifugační zkumavky s 5 kapkami 6% vodného roztoku trylonu B a inkubuje se jednu hodinu při teplotě 37 ° C. Výsledná suspenze leukocytů s Pasteurovou pipetou se převede do čisté zkumavky a potom se nalije do dvou centrifugačních zkumavek o objemu 0,3 ml. Do první zkumavky (experimentální) se přidá 0,1 ml isotonického roztoku chloridu sodného, ​​ve kterém se rozpustí pracovní dávka alergenu, a do druhé zkumavky se přidá 0,1 ml isotonického roztoku chloridu sodného bez alergenu.

Obě zkumavky se inkubují po dobu 10 minut při teplotě 37 ° C, potom se odstřeďují po dobu 10 minut při 1500 otáčkách za minutu. Poté se supernatant nalije a hmota leukocytů, která zůstane na dně zkumavky, se jemně protřepe, rozbije na zbývající kapalinu proudící ze stěn. Pomocí Pasteurovy pipety se obsah každé zkumavky přenese do samostatných skleněných sklíček (ve formě kapky na hraně) a tenké leukocytové nátěry se připraví s leštěným okrajem jiného skla.

Šmouhy obarvené eosin-methylenovou modří podle května - Grunwald po dobu 1-2 minut po vysušení na vzduchu. Po promytí léčiva v methylalkoholu se stěrky mikroskopicky vyšetřují ponořením (zvětšení 10 x 80). Vypočítejte 50 bazofilů na okrajích nátěru a počet poškozených středních buněk. Rychlost poškození buněk v experimentálních a kontrolních přípravcích je určena vzorcem:

Reakce se považuje za pozitivní, když je rychlost 1,4 a vyšší.

L.A. Duyeva a kol. (1986) vybrané pracovní koncentrace a dávky chemických alergenů a antibiotik pro reakci přímého specifického poškození bazofilů krve (Tabulka 4).

Tabulka 4. Pracovní koncentrace a dávky činidel pro RSPB

Zničení testu mastocytů

Pro získání suspenze žírných buněk se intraperitoneálně vstřikuje intraperitoneální injekce 8 - 10 ml (2 - 5 ml myši) izotonického roztoku chloridu sodného zahřátého na 37 ° C, připraveného na 0,15 mol fosfátového pufru s pH 7,2, břicho se mírně masíruje. Suspenze žírných buněk se promyje isotonickým roztokem chloridu sodného a potom odstředí při 500 ot / min.

Suspenze žírných buněk (0,02 ml) a séra pacientů (0,02 ml) se inkubuje po dobu 15 minut při teplotě 37 ° C, potom se přidá 0,02 ml alergenu při předem zvolené koncentraci a znovu se inkubuje po dobu 15 minut při teplotě 37 ° C. Současně se připraví tři kontroly: žírné buňky bez séra a bez alergenu; žírné buňky se sérem bez alergenu; žírných buněk s alergenem bez séra.

Po barvení vzorků 0,025% roztokem toluidinové modři nebo 0,3% roztokem neutrálního inkoustu se naplní suspenze žírných buněk z komory Goryaev a spočítají se namalované buňky srovnáním počtu granulovaných buněk v kontrolní a experimentální buňce. Pozorovaná degranulace žírných buněk v testovaném vzorku je považována za slabě pozitivní, pokud je 10–20% degranulace, pozitivní - s 21–40% a extrémně pozitivní - s degranulací více než 40% buněk ve srovnání s kontrolou.

Koncentrace alergenů, která nezpůsobuje spontánní degranulaci, u antibiotik - 100-1000 U / ml, bichromanu draselného a jodidu, chromanu sodného, ​​síranu nikelnatého - 0,01–0,1% roztoku, formaldehydu - 0,2–0,4%. Alergeny pro domácnost se používají v dávce 10 až 100 PNU.

Reakce pasivní hemaglutinace (RPHA) umožňuje detekci protilátek ve vodě rozpustných a ve vodě nerozpustných alergenů.

Reakce je založena na fenoménu aglutinace erytrocytů senzibilizovaných in vitro na chemické alergeny, s přidáním pacientského séra obsahujícího protilátky proti kapitolám.

Reakce inhibice migrace krevních leukocytů (RTML) je založena na schopnosti senzibilizovaných T-lymfocytů (například na haptenech) vylučovat lymfokin, což je faktor, který inhibuje migraci leukocytů. S pomocí RTML je odhalena reakce buněčného typu (nezávislá na protilátkách) na různé antigeny.

http://medbe.ru/materials/allergicheskie-bolezni/laboratornye-metody-spetsificheskoy-allergodiagnostiki/?PAGEN_2=2

Metodika, cíle a principy diagnostiky alergií in vitro

Yu.A. Mitin, MD, Vojenská lékařská akademie, Petrohrad.

Časopis: "Adresář vedoucího CLL"

Možnosti všech laboratorních metod, včetně metod in vitro alergické diagnózy, jsou omezeny skutečností, že laboratorní lékaři se ve studii nezabývají celým lidským tělem, ale pouze tkáněmi (lymfou, krví, močí atd.). Kromě toho laboratorní metody používané v alergické diagnostice nejsou schopny detekovat morfologické změny ve tkáních, jako některé jiné výzkumné metody (rentgenové, ultrazvukové, atd.), Stejně jako stanovení řady funkčních charakteristik tkání a orgánů ( elektrofyziologická aktivita srdce jako ve studiích EKG, rheoencefalografických charakteristikách jako při studiu REG atd.).

Formulace závěru na základě údajů z alergologického laboratorního vyšetření, laboratorní lékař v podstatě formuluje laboratorní část obecné diagnózy alergického onemocnění. Tento laboratorní fragment diagnózy používá klinik při stanovení plné diagnózy alergického onemocnění, včetně jeho závažnosti a povahy, na základě údajů z anamnézy, kliniky, speciálních, laboratorních a dalších výzkumných metod.

OBECNÝ POPIS ZÁSAD A ÚKOLŮ LABORATORNÍCH DIAGNOSTICKÝCH ALERGICKÝCH CHOROBŮ t

Stanovení etiologie alergického onemocnění, jak je známo, spočívá v identifikaci specifických příčin - alergenů, které způsobují vznik symptomů onemocnění. Formulace moderní definice alergenu a senzibilizace, můžeme říci, že alergen je komplexní látka s epitopem, kritickou molekulovou hmotností, imunitní reakce, na kterou se provádí senzibilizace nebo alergická reakce, a senzibilizace je specifická změna reaktivity imunitního systému v důsledku přítomnosti alergen-specifických protilátek a alergenu. specifických lymfocytů, také vzniku a růstu reprezentace receptorů s různou afinitou pro vazbu alergen-specifických protilátek těl v orgánech a tkáních (Mitin Yu.A., 2005).

Laboratorní diagnostika alergických onemocnění by měla klinikovi pomoci při stanovení etiologie onemocnění, jeho patogenetických charakteristikách, včetně povahy a rozsahu poruch imunitních a jiných tělesných systémů. Hlavními cíli laboratorní diagnostiky alergických onemocnění jsou proto:

• zavedení senzibilizace na alergeny (specifická alergická diagnóza);

• stanovení typu (typů) alergické reakce (specifické alergické diagnózy);

• identifikace povahy a rozsahu imunitních poruch (imunodiagnostika);

• charakterizace patogenetických změn typických pro toto alergické onemocnění (klinická laboratorní diagnostika).

Cílem senzibilizace na alergeny a typu (typů) alergické reakce je tedy cíl specifické alergické diagnózy.

Etiologická diagnóza zahrnuje identifikaci nejen senzibilizace na jednotlivé alergeny, typu (typů) alergické reakce, ale především stanovení jejich úlohy při vývoji daného alergického onemocnění. Využití specifických metod laboratorní diagnostiky alergie: t

• potvrdit přítomnost senzibilizace;

• identifikovat skrytou (subklinickou) senzibilizaci;

• pokud existují kontraindikace kožních testů (exacerbace základního onemocnění; při vývoji akutních infekčních, nervových a duševních onemocnění; v případě dekompenzovaných stavů srdce, onemocnění jater, ledvin a krevního systému; brzy po akutní alergické reakci; během léčby hormony) ;

• ve všech případech, kdy je ukázána Prausnitsa - Kyustnerova reakce, ale není tam žádný příjemce nebo existuje nebezpečí, že se příjemce stane nakaženým infekčním onemocněním, které je přítomno v dárci;

• v případech potřeby diferenciální diagnostiky pozitivních / falešně pozitivních nebo negativních / falešně negativních výsledků získaných kožním testováním. Zásady laboratorní diagnostiky alergických onemocnění:

Vedoucí rolí ošetřujícího lékaře v tandemu je klinický lékař - laborant.

Diagnóza alergického onemocnění zahrnuje 2 stadia: klinické a laboratorní. Před určením specifické laboratorní metody specifické alergické diagnózy je nutné identifikovat rysy imunologického mechanismu pro realizaci alergické reakce u pacienta. Za tímto účelem analyzuje alergik historii, klinické projevy onemocnění v minulosti i současnosti, aby se určily náhle podezřelé alergeny a typ imunologických reakcí. Při identifikaci klinických symptomů nebo syndromů je připisuje určitému typu alergických reakcí, jejichž účastníci (například IgE specifické pro alergické reakce typu 1) musí být stanoveny laboratorními metodami. Stávající laboratorní metody odhalují pouze stav senzibilizace, tj. Indikují modifikovanou reakci imunitního systému pacienta na specifický alergen. Protože charakterizují pouze imunitní poruchy a ne reakci celého organismu, výsledky laboratorní diagnostiky nemohou sloužit jako jediný důkaz, že tento konkrétní alergen je etiologickým činitelem alergického onemocnění.

Proto v tandemu je klinik - laboratorní technik, který určuje rozsah a nezbytnost určitých výzkumných metod - klinik - jinými slovy definuje diagnostickou strategii.

Priorita klinického stádia (objem a metody laboratorních studií jsou stanoveny ve stadiu klinického vyšetření).

Při plánování laboratorní diagnostiky a potřebě některých specifických výzkumných metod je třeba vzít v úvahu rozdíly v imunologických mechanismech a účastnících různých typů alergických reakcí, protože většina laboratorních metod poskytuje informace pouze o konkrétních účastnících imunitní reakce (například k detekci specifických protilátek tříd IgG nebo IgM u typu 2). alergické reakce, jakož i senzibilizované lymfocyty s alergickými reakcemi typu 4. Tudíž předpoklad patogeneze eneticheskih mechanismy alergických onemocnění mohou mít vliv na výběr konkrétních výzkumných metod, vyžaduje použití vhodných metod patogeneze, tedy odůvodňuje zásadu 3.

Patogenetická přiměřenost (shoda použitých laboratorních výzkumných metod s patogenezí sledovaných reakcí).

Imunologické testy u alergické diagnózy lze rozdělit do dvou velkých skupin:

1) nespecifické (zaměřené na identifikaci běžných změn v imunitním systému během alergií);

2) specifické (identifikace protilátek a buněk zapojených do imunologické fáze alergické reakce).

Specifická alergická diagnostika invitro obsahuje 2 hlavní typy testů: detekci protilátek (přímo nebo nepřímo) nebo alergenem senzitivních lymfocytů. Stávající imunologické metody specifické alergické diagnostiky odhalují stav senzibilizace, tj. Indikují modifikovanou reakci imunitního systému pouze na specifický alergen, ale nemohou sloužit jako jediný důkaz, že alergie způsobuje alergickou reakci, která je charakterizována přítomností reakce několika tkání nebo alergického onemocnění. který vyžaduje přítomnost reakce celého organismu.

Aby bylo možné plně charakterizovat změny pouze jednoho (imunitního) systému, je třeba provést řadu dalších studií, které by kromě identifikace a alergenu, který ji způsobuje. Pro úplnější charakterizaci specifických a nespecifických změn v imunitním systému je proto nutné implementovat 4 principy.

Kombinace specifických a nespecifických metod imunodiagnostiky.

V diferenciální diagnostice alergických a nealergických (pseudoalergických) onemocnění je nutné objasnit zapojení imunologických mechanismů (imunopatogeneze) do jejich implementace. Je známo, že alergické a pseudoalergické procesy se liší hlavně přítomností (při alergii) nebo absencí (u pseudoalergie) imunologické (první) fáze alergické reakce. Vzhledem k tomu, že ostatní 2 fáze, patologické a patofyziologické, jsou pro tyto procesy běžné, můžeme formulovat další důležitý princip pro diferenciální diagnostiku alergie a pseudoalergie.

Zavedení neimunologických (pseudoalergických) mechanismů nemocí vyloučením imunologických mechanismů.

K tomuto účelu se používají metody pro studium imunopatogeneze alergií, které určují možné účastníky imunologické fáze, například stanovení specifických protilátek třídy IgE v reakcích typu 1 nebo senzibilizovaných lymfocytů v reakcích typu 4. Pouze negativní reakce z těchto studií naznačuje, že reakce nebo onemocnění jsou v přírodě pseudoalergické.

Standardní techniky, dostupnost laboratorních testů kontroly kvality.

Kritéria, která charakterizují různé typy laboratorní diagnostiky, mohou být spojena s hodnocením různých složek jejich účinnosti: analytické, ekonomické a diagnostické. Analytickou charakteristikou se rozumí minimální množství látky stanovené metodou. Ekonomická charakteristika je spojena s odhadem nákladů na 1 výzkum. Diagnostický přístup je spojen s hodnocením laboratorních testů, které je založeno na rozložení výsledků výzkumu na pravdivé a nepravdivé. Jako metoda používaná k vyhodnocení výsledků se používá koncept neposkvrněného „zlatého standardu“, tj. některé metody jsou uznávány jako měřítko, s nímž jsou porovnávány jiné metody.

Všechny výsledky výzkumu: pacienti mohou mít u zdravých pacientů pravdivý pozitivní (PI) a falešně negativní (LO), pravdivý negativní (IO) a falešně pozitivní (LP).

Diagnostická citlivost (Se, citlivost). Představuje procento frekvence skutečných pozitivních výsledků testu u pacientů s tímto onemocněním do součtu skutečných pozitivních a falešně negativních výsledků nebo jinými slovy jako podíl pacientů, kteří vykazují pozitivní výsledek, nebo jako frekvence pozitivního výsledku testu u pacientů:

Se = (PS / S) x100%, kde PS je skutečně pozitivní, S je počet pacientů.

Diagnostická specificita (Sp, specificita) je procento pravdivě negativních výsledků u lidí, kteří netrpí onemocněním (zdravým) až do součtu pravdivě negativních výsledků (tj. Pravděpodobnosti negativního testu v nepřítomnosti nemoci), jinými slovy frekvence negativního výsledku testu získaného ze zdravých osoby:

Sp = (NH / H) x100%, kde NH je skutečný negativní výsledek testu a H je počet zdravých jedinců.

Diagnostická účinnost (DE) je procento pravdivosti, to znamená, že odpovídá stavu výsledků testovaných pacientů, celkovému počtu získaných výsledků nebo poměru skutečných výsledků v celkovém počtu studií:

DE = (PS + NH) n, kde PS je počet pravdivě pozitivních případů, NH je počet pravdivě negativních případů, a je počet studií.

Obecně platí, že křivky specifičnosti a citlivosti při určování jakéhokoliv kvantitativního parametru jsou v určitém vztahu (více méně). Důležitou roli hraje určení bodu rozdělení - úroveň registrace pozitivního výsledku. Současně se za účelem stanovení bodu oddělení s ohledem na důsledky falešných rozhodnutí použije křivka ROC (relativní provozní charakteristika), tj. křivka vzájemné závislosti pravděpodobností falešně pozitivních a falešně negativních výsledků. Při použití této křivky platí následující situace: posun bodu oddělování při určování nízkých koncentrací zvyšuje citlivost (detekuje se více pacientů), ale zároveň se zvyšuje počet falešně pozitivních výsledků. Proto je jeho využití postaveno na volbě bodu separace na základě posouzení „dobrého“ a „poškození“ poměru pravdivých a falešných rozhodnutí (více pozitivních - více falešně pozitivních, negativnějších - více falešně negativních). Bohužel, alergici dosud nenalezli ideální, všeobecně uznávanou metodu, která by umožnila 100% případů odhalit skutečnou senzibilizaci - bez falešně pozitivních nebo falešně negativních výsledků, zcela korelovajících s výsledky klinické diagnostiky.

Výsledkem celého diagnostického procesu je vyhodnocení laboratorních dat z klinického hlediska - klinická a imunologická interpretace laboratorních výsledků.

Pro posouzení změn imunitního systému jsou nutné speciální (imunologické) laboratorní metody. Rozpoznávání alergenů a následné alergické reakce spouštějí aktivaci imunitního systému. Pro zjištění rozsahu takové aktivace jsou prováděny laboratorní studie, které hodnotí změny morfologie a funkcí různých částí imunitního systému. Pro tento účel se používají testy k určení subpopulací T a B lymfocytů, hladiny imunoglobulinů, komplementu, cirkulujících imunitních komplexů, mediátorů alergického zánětu a cytokinů, které se více podílejí na imunitní reakci na alergeny: IL-4 (aktivace IgE produktů), IL -10, IL-5, interferon gama a další 6–18 hodin po reakci s alergenem na senzibilizovaných lymfocytech je zvýšena exprese receptorů IL-2, jejichž úroveň může být stanovena pomocí monoklonálních protilátek proti antigenu CD25. Se stejným účelem je možné stanovit přítomnost dalších aktivačních molekul na CD lymfocytech - CD69, CD71. Je známo, že stimulace lymfocytů alergeny zvyšuje sekreci IL-5, IL-4, gama-interferonu, ale ne IL-2 a faktoru nekrózy nádoru-alfa. Alergická onemocnění mohou být doprovázena změnami ve vzorcích periferní krve a proteinových frakcí. Často je zde lymfocytóza, zvýšení obsahu proteinových frakcí, snížení hladiny krevních destiček a albuminu. Navíc může dojít ke zvýšení obsahu ESR, leukocytů a eosinofilů.

Typické změny v imunitním systému, ke kterým dochází při alergických reakcích a onemocněních:

• snížení absolutní a relativní hladiny T-buněk (fenotyp CD3 + CD8 +);

• změna počtu pomocných T-buněk (fenotyp CD3 + CD4 +);

• zvýšené hladiny aktivovaných T-lymfocytů (HLA-DR +, CD25 +);

• změna hladiny cytokinů - zvýšení koncentrace IL-4 a IL-5, snížení obsahu interferonu gama;

• zvýšené hladiny IgG, IgM, celkového IgE;

• snížení fagocytární aktivity neutrofilních leukocytů;

• zvýšené hladiny eosinofilů kationtového proteinu;

• zvýšení úrovně CEC.

V klinické praxi se nejčastěji používá studium hladin celkového imunoglobulinu specifického pro alergen a alergenu E. Uvažujme o interpretaci těchto studií.

Vlastnosti interpretace studií celkového IgE.

1. Zvýšení hladiny celkového IgE může být způsobeno nejen atopií, ale i řadou dalších onemocnění, včetně onemocnění helmintické invaze, imunodeficience, bronchopulmonální aspergilóza atd.

2. Normální hladina celkového IgE v séru nepopírá přítomnost senzibilizace. Přibližně třetina pacientů s atopickým onemocněním, hladina celkového IgE může být v normálním rozmezí (30-100 kE / l).

3. V případě senzibilizace na jeden (několik) alergenů může být obsah celkového IgE v normálním rozmezí a specifické IgE - zvýšené.

4. Koncentrace celkového IgE v séru může být v normálním rozmezí v neatopických stavech neimunitní povahy chronické recidivující kopřivky a angioedému.

5. Horní hranice normy celkového IgE (100 kE / l) u zástupců zón endemických pro helminthiasis může být vyšší než obvykle.

6. Detekce alergen-specifického IgE (na jakýkoliv alergen nebo antigen) odhaluje pouze senzibilizaci a ještě neprokazuje, že tento alergen je příčinou alergického onemocnění.

Vlastnosti interpretace studií specifických IgE.

1. Negativní výsledek studií na specifických IgE může být způsoben skríningovou strategií (u tohoto alergenu nebyl proveden žádný test). Nepřítomnost specifického IgE v séru periferní krve nevylučuje možnost účasti v patogenezi IgE-dependentního mechanismu alergické reakce, protože je možná lokální syntéza IgE nebo vazba syntetizovaných IgE tkání, které mohou nastat bez změny koncentrace specifického IgE v periferní krvi.

2. Protilátky jiných tříd, zejména IgG (IgG4), specifické pro alergen, mohou být v některých případech příčinou falešně negativních výsledků.

3. Vysoká úroveň imunoglobulinu E specifického pro alergen charakterizuje přítomnost vysokého stupně senzibilizace pouze ve vztahu ke specifickému studovanému alergenu.

4. Při vysokých koncentracích celkového IgE se mohou objevit falešně pozitivní výsledky studií specifického IgE Za takových podmínek se zvyšuje pravděpodobnost nespecifické vazby IgE na alergen.

5. Identické kvantitativní výsledky stanovení specifického IgE pro různé alergeny neznamenají stejnou klinickou hodnotu.

6. Konečné uzavření a interpretaci laboratorních dat musí provést alergik na základě srovnání laboratorních výsledků s klinickým obrazem a anamnézou alergií.

Na závěr můžeme ještě jednou připomenout hlavní výhody imunoanalytických metod používaných v alergologii:

• bezpečnost pacientů;

• možnost provádět výzkum v jakémkoli věku, včetně raného dětství, v období exacerbace s vysokým stupněm senzibilizace;

• identifikace reakcí na velký počet alergenů pro 1 studii;

• žádný účinek změněné reaktivity kůže;

http://www.alkorbio.ru/allergodiagnostika0/metodologiyazadachiiprintsipiallergodiagnostikiinvitro.html

Laboratorní metody alergické diagnostiky

Tyto metody mohou být široce používány při alergických onemocněních v akutní fázi, v období masivního kontaktu s alergenem, s vysokou citlivostí pacientů na alergen, pokud jsou u dětí kontraindikace při identifikaci alergických nemocí z povolání, protože vylučují možnost nespecifických, falešně alergických reakcí.

Metody, které detekují alergickou reakci okamžitého typu závislého na B zahrnují:

a) stanovení celkového IgE (nicméně jeho vysoká hladina může být v produktivní fázi imunitní reakce),

b) stanovení alergen-specifických IgE a IgG4.

Hladiny IgE a IgG4 se stanoví testem ELISA (viz lab. Třída 6).

Detekce IgE a IgG4 se provádí proti více než 400 alergenům, včetně potravinových alergenů; alergeny bakterií a hub, zvířecí lupy a lupy, ptačí peří; alergeny trávy a pylu stromů; alergeny klíšťat, domácího a knihovního prachu, hmyzu; léčivé a pracovní alergeny.

V současné době byly vyvinuty testovací systémy, které umožňují vícenásobnou diagnostiku specifických IgE. Vícečetný alergosorbentní test s použitím chemiluminiscenční analýzy (MAST-CLA, nebo MAST-alergotest) umožňuje současně stanovit až 36 alergenů s použitím malého množství séra (0,75 ml). Pro tento test se používá MAAST-alergopanel, což je duté průhledné plastové pouzdro s nejtenčími celulózovými vlákny rovnoběžnými s vnitřkem, na kterých jsou alergeny sorbovány (Obr. 9.1).

Poznámka: 1 - Sestava panelu MAST, 2 - kryt,

3 - celulózová příze s adsorbovaným alergenem, 4 - tělo

Obr. 9.1 Princip chemiluminiscenční analýzy během MAST

Podstatou alergického testu MAST je provedení reakce vazby alergenu se specifickými IgE, následované značením výsledného komplexu fotoreagentem a určením jeho luminiscence, jejíž intenzita je úměrná koncentraci specifického IgE v séru pacienta. Alergopanel MAST se naplní (běžnou injekční stříkačkou) sérum pacienta, inkubuje se 16 až 24 hodin při teplotě místnosti. Poté se po promytí panelu obyčejnou destilovanou vodou pufrem naplní konjugátem (peroxidázou značená anti-IgG) a inkubuje se po dobu 4 hodin. Po promytí se panel naplní fotoreagentem a analyzuje v luminometrech. Zařízení registruje třídu hodnot od 0 do 4 v souladu s úrovní luminiscence z každého jednotlivého vlákna panelu. Tyto třídy odpovídají třídám kožních testů. Úrovně IgE odpovídající třídám alergie MAST a hodnotám luminometru jsou uvedeny v tabulce 9.2.

Interpretace výsledků při provádění vícečetného alergického testu

Spolu s detekcí specifických IgE se používají další laboratorní testy k diagnostice jak na protilátkách závislých, tak na zpožděných reakcích. Tyto metody nám umožňují studovat patogenezi alergických reakcí. Patří mezi ně:

- degranulační reakce žírných buněk nebo basofilů,

- reakce inhibice migrace krevních leukocytů (RTML),

- reakce na poškození neutrofilů (RPN),

- definice vázaného histaminu,

- stanovení IL 4,5,6, TGFb,

- stanovení tryptázy a chymotryptasy (tryptáza, zejména β-forma, může být detekována v krvi 4 hodiny po anafylaktické reakci a slouží jako klinický marker anafylaxe),

- stanovení leukotrienů (LTC4, LTD4, LTE4) s použitím testu uvolňování buněčných mediátorů,

- stanovení počtu aktivovaných bazofilů exprimujících CD63 antigen (gp53) na povrchu v odezvě na stimulaci alergenu (cytometrický test stimulující alergen, CASC test).

Definice těchto ukazatelů vám umožní pochopit jednotlivé charakteristiky průběhu alergických reakcí, které jsou důležité pro léčbu pacienta.

Buněčný test na uvolňování mediátorů je založen na stanovení sulfidol-leukotrienů (LTC4, LTD4, LTE4) vylučovaných bazofily pod vlivem alergenu in vitro (Obr. 9.2). Také se nazývá in vitro provokativní test. Vzhledem k de novo syntéze sulfidol-leukotrienů má tento test vyšší specificitu ve srovnání s klasickým testem uvolňování histaminu. Protokol studie obsahuje tři kroky:

1) izolaci populace lymfocytů ze stabilizované EDTA krve,

2) stimulace lymfocytové suspenze specifickými alergeny,

3) enzymově vázaný imunosorbentní test leukotrienů syntetizovaných bazofily během stimulace.

Obrázek 9.2 Princip stimulačních testů bazofilního antigenu

Test se považuje za pozitivní pro potraviny, inhalační alergeny, latex, hmyzí jedy při stanovení hladiny leukotrienů 200 pg / ml; pro lékové alergeny, jakož i potravinářské a chemické přísady 40 pg / ml.

Cytometrická varianta stimulačního testu basofilů - cytometrický antigen, který stimuluje buněčný test (CASK test) umožňuje stanovit počet aktivovaných bazofilů exprimujících antigen CD63 na povrchu. Fáze izolace lymfocytů a stimulace jejich antigenů pro obě varianty (enzymová imunoanalýza a cytometrie) jsou identické. Ale místo sulfidol leukotrienů třetí stupeň určuje počet aktivovaných bazofilů exprimujících CD63 antigen (gp53) na povrchu v reakci na stimulaci alergenem. Test je vysoce citlivý a specifický pro reakce anafylaktického typu, zejména pro přecitlivělost na léky.

V testu CASK jsou izolované leukocyty inkubovány se stimulačním pufrem a alergenem. Pak se přidá anti-IgE monoklonální Ab s fluorescenční značkou pro identifikaci bazofilů, pak monoklonálních protilátek k CD63 (viz obr. 9.2) a exprese CD63 AH se stanoví na povrchu bazofilu průtokovou cytometrií. Například u potravinových a inhalačních alergenů je test považován za pozitivní, když je CD63 exprimován na povrchu 15% bazofilů; pro jedy hmyzu - 10%; beta-laktamová antibiotika a analgetika - 5% bazofilů a stimulační index 2. Vypočítejte index stimulace definovaný jako poměr bazofilů CD63 + ve vzorku s alergenem (%) k počtu těchto buněk ve vzorku bez alergenu (%).

Caska test je specifický pro stanovení IgE-zprostředkované alergie na inhalační alergeny (při kožní zkoušky nemohou být provedeny kvůli riziku bronchospasmu a status asthmaticus), pyl, drogy, beta-laktamových antibiotik, svalová relaxancia, analgetika, alergie na latex, bodnutí z Hymenoptera hmyz, pseudoalergické reakce na protizánětlivé nesteroidní léky indukované komplementovými složkami, plazma, stanovení autoprotilátek proti IgE. Výsledky testu CASK dobře korelují s výsledky kožních testů.

Oba testy jsou vysoce specifické pro diagnostiku potravinových alergií a nesnášenlivosti, inhalační alergie, kdy nelze použít kožní testy (pro alergie na latex, kousnutí hmyzu hymenoptera, alergie u dětí, alergie na léky a intolerance, různé pseudoalergické reakce).

Použití CASK-testu a buněčného testu uvolnění mediátorů v diagnostice potravinových alergií a intolerance, pseudoalergické reakce mohou být použity k sestavení hypoalergenní a eliminační diety.

Diagnostika pseudoalergických reakcí. Pseudoalergické reakce v klinických symptomech mohou být podobné skutečným reakcím zprostředkovaným IgE, ale liší se svým vývojovým mechanismem. Jejich vývoj nesouvisí s tvorbou Ab nebo s účastí senzibilizovaných lymfocytů, v patogenezi těchto reakcí jsou pouze dva stupně - patchemické a patofyziologické. V tomto ohledu je u těchto pacientů sérová koncentrace IgE obvykle v normálním rozmezí.

Během pseudoalergických reakcí však dochází k nespecifickému uvolňování mediátorů: histamin, leukotrieny, prostaglandiny. Pro diagnostiku pseudoalergických reakcí se proto test CASA používá k detekci aktivovaných bazofilů a buněčných testů uvolňování mediátorů za účelem stanovení koncentrace LTC4, LTD4 a LTE.

http://studopedia.org/12-101069.html
Více Články O Alergenech